病毒RNA提取試劑盒說明書

RNApure Virus Kit

目錄號：K0586

運(yùn)輸條件：室溫（15-25℃）。

保存條件：室溫（15-25℃）。

組分說明

                    Size                            50

                    Buffer RLV                     15 ml

                    Buffer RW1                     40 ml

                    Buffer RW2（concentrate）        11 ml

                    Proteinase K                  12.5 mg

                    Proteinase K Storage Buffer   1.25 ml

                    RNase-Free Water               10 ml

                    Spin Column RS                  50

                    Collection Tube（1.5 ml）         50

                    Collection Tube（2 ml）           50

              本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡介

　　本試劑盒采用可以特異性結(jié)合病毒 RNA的吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，適用于從血清、血漿、尿液、腦脊液等無細(xì)胞體液及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離病毒RNA。病毒RNA特異性地結(jié)合到硅基質(zhì)膜上，而污染物則流過該膜。通過兩次高效洗滌*去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，然后用無RNase的水或試劑盒提供的RNase-Free  Water洗脫高純度的病毒RNA。由本試劑盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time  RT-PCR和印跡分析等實(shí)驗(yàn)。

自備試劑：無水乙醇，0.9% NaCl。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

1．向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase  K勿長時間室溫放置，避免反復(fù)凍融，以免影響其活性。

2．預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：

   1）使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。

   2）玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。

   3）配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。

   4）操作人員戴一次性口罩和手套，實(shí)驗(yàn)過程中要勤換手套。

3．血清或血漿避免反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白變性或產(chǎn)生沉淀，減少病毒滴度進(jìn)而影響提取病毒核酸的產(chǎn)量。

4．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在Buffer RW2中加入無水乙醇。

5．Buffer RLV如果產(chǎn)生沉淀，可在56℃加熱使其溶解后室溫放置。

6．所有離心步驟若無特殊說明均在室溫下進(jìn)行，且所有操作步驟動作要迅速。

操作步驟

1．室溫下取200 μl血清或血漿加到1.5 ml離心管（自備）中。

   注意：不足200 μl可以加入0.9 % NaCl（客戶自備）補(bǔ)足。

2．向上步溶液中加入20 μl Proteinase K，混勻。

3．加入200 μl Buffer RLV，渦旋震蕩15秒。

   注意：不要直接把Proteinase K加到Buffer RLV中。

4．56℃孵育15分鐘，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。

5．加入250 μl無水乙醇，渦旋震蕩15秒，室溫孵育5分鐘，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。

6．將步驟5得溶液全部加入到已裝入收集管（Collection  Tube 2  ml）的吸附柱（Spin Column RS）中，若一次不能將全部溶液加入吸附柱中，請分兩次轉(zhuǎn)入，8,000 rpm（~6000 ×g）離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW1，8,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

8．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2（使用前檢查是否加入無水乙醇），8,000  rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱中加入500 μl無水乙醇，8,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

10.12,000 rpm (~13,400×g)離心3分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以*晾干。

   注意：1）這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。

   2）推薦步驟：將吸附柱放入一個新的1.5 ml離心管（自備）中，打開管蓋，56℃烘箱孵育3分鐘，使吸附柱的膜*干燥。

11.將吸附柱置于一個新的無RNase離心管（Collection Tube 1.5  ml）中，向吸附柱的中間部位懸空加入20-50 μl RNase-Free Water，室溫放置5分鐘，12,000 rpm離心1分鐘，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。

   注意：1）RNase-Free Water體積不應(yīng)小于20 μl，體積過小影響回收率。

   2）如果要提高RNA的產(chǎn)量，可用20-50 μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟11。

   3）如果要提高RNA濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復(fù)步驟11。

相關(guān)產(chǎn)品信息

目錄號                 產(chǎn)品名稱                                       產(chǎn)品特點(diǎn)

K0580     TRIzon總RNA提取試劑                                   適用范圍廣的RNA提取試劑

K0581     超純RNA提取試劑盒

                                                        兼具有適用范圍廣和純度高特點(diǎn)的RNA提取試劑

K0597     超純RNA提取試劑盒（含DnaseI）

                                                        靈敏度高，可識別pg級別的模板。與RNA親和力強(qiáng)，

K0741     SuperRT cDNA第一鏈合成試劑盒

                                                         能夠通讀GC含量高，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板

K0744     HiFi-MMLV cDNA第一鏈合成試劑盒                 高效獲得cDNA產(chǎn)物

K2381  SuperQuickRT  cDNA第一鏈合成試逆轉(zhuǎn)錄             （針對于熒光定量PCR）

      劑盒(For Real-time PCR                                                    僅需15分鐘，即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

K2391     SuperQuickRT MasterMix                                             即用型逆轉(zhuǎn)錄mix，只需加入RNA和水即可反應(yīng)

 (for Real-Time PCR)                                    僅需15分鐘，即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

K0688     Es Taq DNA Polymerase

                                       兼具高擴(kuò)增效率和高保真性的PCR產(chǎn)品

K0690     Es Taq MasterMix

K0957     UltraSYBR Mixture                                         熒光定量PCR—SYBR Green法

K0956    UltraSYBR Mixture（With ROX）           特異性強(qiáng)、Ct值低、定量更準(zhǔn)確

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